• 09309181270

دستورالعمل سنجش مولکول های بیولوژیک به روشPCR و real-time PCR

دستورالعمل سنجش مولکول های بیولوژیک به روشPCR  و real-time PCR

شرکت دانش بنیان بهپاد طب ایرانیان با توجه به درخواست های روزافزون محققین داخل کشور برای ارائه خدمات ارزیابی های مولکولی نمونه های بیولوژیک، با بهره گیری از حضور متخصصین ایمونولوژی اقدام به فراهم آوردن امکانات و شرایط استاندارد سنجش انواع مولکول ها را نموده است که اطلاعات ضروری در این رابطه به شرح ذیل می باشد:

  1. لیست پرایمرهای موجود، در ذیل قید گردیده است. سایر مواردی که در لیست قید نشده نیز درصورت تقاضا بررسی و سفارش پذیرفته میشود.
  2. سفارش انجام تست برای پرایمر های آماده نیز پذیرفته می گردد.
  3. سنجش مولکولهایی که پرایمرهای آن موجود باشد ( در صورت آماده بودن نمونه cDNA)  ظرف مدت یک ماه و پرایمر های سفارشی حداقل 2 الی 3  ماه پس از تکمیل مراحل درخواست وعقد قرارداد صورت خواهد پذیرفت. در صورتی که نمونه به صورت سلول یا بافت باشد، یک ماه بر مدت انجام تست افزوده خواهد شد.
  4. کلیه سنجش ها توسط کارشناس ارشد ایمونولوژی و تحت نظارت متخصص ایمونولوژی انجام می گردد.
  5. اکیداً توصیه میشود نحوه جمع آوری، نگهداری و انتقال نمونه ها به آزمایشگاه را به دقت مطالعه فرمایید.

لیست پرایمر های طراحی شده:

ردیف نام سایتوکاین نوع پرایمر موجود / سفارش
1 TNF-α انسانی موجود
2 TGF-β انسانی موجود
3 IFN-γ انسانی موجود
4 IL- انسانی موجود
5 IL-4 انسانی موجود
6 IL-6 انسانی موجود
7 IL-8 انسانی موجود
8 IL-10        انسانی موجود
9 IL-18 انسانی موجود
10

IL-18 BP

IL-18 BindingProtein

انسانی موجود
11 CXCR4 انسانی موجود
12

CXCL10 (IP10)

IFN-g inducer

انسانی موجود
13 TLR2 انسانی موجود
14 TLR4 انسانی موجود


v   50 درصد هزینه قبل از انجام کار در زمان تحویل نمونه ها به آزمایشگاه دریافت میگردد.

v   50 درصد باقیمانده هزینه پس از انجام کار در زمان تحویل نتایج دریافت خواهد شد.

v   نتایج پس از تسویه حساب کامل به محقق تحویل داده خواهد شد.

روش نگهداری نمونه ها در آزمایشگاه و بررسی کیفیت انجام کار توسط مسئول مربوطه:

v   نمونه ها توسط کارشناس مربوطه تحویل گرفته شده و در منهای 70 نگهداری میشوند

v   آزمایشات در مدت مقرر انجام و نتایج توسط مسئول مربوطه بررسی و تایید میگردد.

شیوهجمعآوری،نگهداریوانتقال نمونه ها به آزمایشگاه

v    نمونه RNA یا cDNA

  1. نمونه RNA یا cDNA در شرایط سرد (با استفاده از کول باکس یا یخ خشک) ظرف حداکثر یک ساعت به آزمایشگاه انتقال یابد.
  2. باید توجه داشت که نمونه های RNA بسیار حساس بوده و در مقابل،RNase آنزیمی بسیار مقاوم و فعال است و ظرف چند دقیقه RNA را بدون نیاز به کوفاکتور تجزیه می نماید. در نتیجه به هنگام تماس با ویال حاوی RNA حتما از دستکش های تمیز استفاده نمایید، زیرا دست ها نمونه غنی از RNase می باشند.
  3. ویال های حاوی RNA را در نایلون ها یا باکس های تمیز (ترجیحا استریل شده با الکل 70% ) انتقال دهید.
  4. در صورت مشخص بودن غلظت RNA  100-500 نانوگرم از هر نمونه جهت ساخت cDNA نیاز است. مابقی cDNA پس از انجام تست به سفارش دهنده تحویل داده خواهد شد.
  5. در صورت مشخص بودن غلظت cDNA20 میکرولیتراز نمونه با غلظت 100نانوگرم در میکرولیترمورد نیاز است.
  6. در صورت مشخص نبودن غلظت RNA یا cDNAبا کارشناس آزمایشگاه تماس داشته باشید.

v    نمونه های بافتی و سلولی( شامل: خون، سلول های کشت داده شده، بافت تازه، فریز شده و یا پارافینه):

v  1 میلی لیتر از خون تازه را به ویال های استریل (ترجیحا RNaseDNase Free)آغشته به سیترات یا EDTA را در شرایط استریل (زیر هود بیولوژیک) انتقال دهید و ظرف حداکثر چند ساعت در شرایط سرد به آزمایشگاه انتقال دهید.

v  هرگز از هپارین به عنوان ماده ضد انعقاد استفاده نکنید، زیرا این ماده در انجام مراحل پایین دست اختلال ایجاد می کند.

v  پس از تهیه بافت تازه آن را فورا به بافرPBS سرد و استریل انتقال دهید؛ سپس با یک اسکارپل استریل یک با مصرف نمونه را به اندازه 50-100 میلی گرم برش داده و مجددا به بافر انتقال دهید. سپس نمونه ها را فورا با حفظ شرایط سرما به آزمایشگاه انتقال دهید. به صورت جایگزین نیز می توان نمونه ها را در ظرف حاوی RNAlaterانتقال داد. در این حالت نمونه ها به مدت یک هفته در دمای اتاق یا مدت زمان طولانی تر در 4 یا منهای 20 درجه نگه داری نمود. جهت تهیه RNAlaterمی توانید با آزمایشگاه تماس حاصل نمایید.

v  در صورتی که قادر به انتقال سریع نمونه های به همراه بافرPBS به آزمایشگاه نمی باشید، دور آنها را دو بار با  فویل ضخیمی پوشانده سپس با قرار دادن در یک ظرف پلاستیکی استریل مناسب (مانند ظرف جمع آوری) در تانک ازت قرار دهید.

v  نمونه های فریز شده را پس از برداشت از تانک ازت در شرایط سرد (بر روی یخ خشک) فورا به آزمایشگاه انتقال دهید. نمونه ها نباید در حین انتقال آب شوند، زیرا در این صورت از کیفیت RNA استخراج شده کاسته می شود.

v  پتریدیش حاوی سلول های کشت داده شده را از انکوباتور خارج کرده و اجازه دهید تا در زیر هود به دمای اتاق برسد، سپس آن را باکس حاوی یخ خشک انتقال داده و به آزمایشگاه منتقل نمایید.

v  نمونه های پارافینه به صورت دو تکه 10 میکرونی برش داده و در ویال های استریل 2 میلی لیتری (ترجیحا RNaseDNase Free) انتقال داده شود. لازم به ذکر است که نمونه ها باید به صورت تازه برش داده شود و نباید وقفه زیادی بین تهیه برش و انجام استخراج صورت گیرد.

v    نمونه ها بطور دقیق و اصولی شماره گذاری شوند.

v  زمان یکی از کلیدی ترین فاکتورهای موثر بر کیفیت نمونه می باشد، لذا تمام تلاش خود را برای جلوگیری از اتلاف وقت حاصل نمایید.

v  در آزمایشگاه تمامی کیتها  و مواد مورد قبل از استفاده از نمونه ها، از نظر کیفیت عملکرد کنترل شده و در صورتیکه نمونه های استاندارد جواب دهند، عدم جوابدهی نمونه ها مربوط به وضعیت نمونه و یا شرایط نگهداری و حمل آن است که آزمایشگاه مسئولیتی در قبال آن ندارد. به عبارت دیگر چنانچه 5 نمونه استانداردی که با هر مجموعه نمونه مورد آزمایش و برای تعیین کارآمدی (Efficiency) سنجش میشوند جواب قابل قبولی (105%-95%)داشته باشند، جوابهای به دست آمده برای نمونهها از نظر آزمایشگاه نهایی و قطعی بوده و هرگونه نتیجه دور از انتظار ، به نحوه و شرایط انجام آزمایش مربوط نبوده و به شرایط جمع آوری و یا ذخیره سازی نمونهها مرتبط میباشد.

نحوه سفارش درخواست:

متقاضیان برای سفارش سنجش های ملکولی میتوانند همه روزه از شنبه تا چهارشنبه از ساعت 10 لغایت 17 با شماره تلفن 09309181270-88984953 مسئول ثبت درخواست ها و سفارشات شرکت تماس حاصل فرمایند.

پست الکترونیکی این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید

تعرفه خدمات:

هزینه بر اساس نوع سفارش، حجم کار و مواد و وسایل مصرفی مورد نیاز مورد توافق قرار می گیرد